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基因组DNA污染是RNA样品中普遍存在的现象。由于污染的gDNA也会作为后续PCR的模板，因此会严重干扰后续RT-PCR的效率和准确性，尤其是定量RT-PCR。目前的去gDNA污染的方法主要是用RNase-free DNase法降解RNA样品中的gDNA，灭活DNase后，然后再进行RT反应。此方法分两步进行，十分不便。为了克服上述方法的缺点，本公司开发出了本制品。

• 一管式去除gDNA，跟RT-PCR反应的设置同步进行。
  
• 高效，可以使样品中残留的gDNA污染（ng级）降低到PCR检测不到的水平。
  
• 跟PCR和荧光定量PCR兼容，包括基于古细菌DNA聚合酶的PCR（如Pfu DNA聚合酶，多为高保真酶）。
  
• 本试剂盒所用的MMLV逆转录酶为RNase H缺失突变，故合成cDNA片段长度可达12kb。还能用于GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。

• 在一个干净的无RNase反应管管中加入RNA模板，不超过13μL。
  

  RNA模板种类	加入量
  总RNA	100～500ng
  poly(A) mRNA	10～500ng
  专一的RNA	0.01pg～500ng

• 加入4μL 4×RT Buffer。
  
• 再加入1μL抗污染MMLV逆转录酶。常温放置30分钟去除gDNA。
  
• 按下表加入引物：
  

  引物种类	加入量
  随机引物(0.2μg/μL)	1μL
  RNA模板专一性引物	1μL（20pmol）

  • 随机引物与RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。
• 加入1μL 10mM each的dNTP。加入引物和dNTP后必须马上进入后续操作，不要放置。
  
• 最后补水使得总体积为20μL。
  
• 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。但如果使用随机引物，由于其很短，则改成25℃ 5分钟以便其跟RNA结合。
  
• 42℃保温60分钟。但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，待合成了一段cDNA后，然后再转移到42℃保温60分钟。此步为RT反应。
  
• 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。
  
• 轻轻吹打混匀，短暂离心，37℃保温60分钟进行抗污染逆转录。
  
• 95℃ 10分钟加热灭活相关酶，短暂离心，直接作为模板用于后续常规PCR、染料法qPCR或探针法qPCR实验，或者长期放-20℃待用。用于后续PCR时，一般使用量不超过终体积的1/10，具体需要根据各厂家的PCR试剂盒确定。